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2020年14期

過表達KAR2基因對畢赤酵母產米黑根毛霉脂肪酶的影響

作  者 黃金金,孫夢雪,王一洲,趙慶伊,張 馨,張愷倪
第一作者 黃金金
作者單位 江蘇師范大學藥用植物生物技術實驗室,生命科學學院,江蘇徐州
卷  號 48
發表年份 2020
發表刊期 14
發表頁面 103-107
關  鍵  字 米黑根毛霉脂肪酶;KAR2;過表達;畢赤酵母;UPR
摘  要 Kar2p是分子伴侶蛋白,可與新生肽結合,促進新生肽進入內質網。為研究其對米黑根毛霉脂肪酶 (RML) 在畢赤酵母中表達的影響,通過PCR方法從畢赤酵母菌株中克隆到KAR2基因,并用畢赤酵母胞內表達載體pPIC3.5K構建過表達質粒KAR2-pPIC3.5K。用電轉化的方法,將KAR2-pPIC3.5K二次轉化到含4-拷貝rml基因的畢赤酵母重組菌株4pRML-X33中,獲得能同時過表達RML和KAR2p的二次轉化子4pRML-X33-KAR2。搖瓶發酵發現,過表達KAR2基因對菌株生長無明顯影響,但RML胞外酶活降低。采用RT-qPCR方法分析菌中rml及UPR相關基因的轉錄水平,發現KAR2基因轉錄水平上調了3.7倍,雖然僅引起與UPR相關的HAC1基因轉錄水平的下調,但卻使rml的表達下調43%。說明KAR2過表達導致RML產量降低是降低了rml的mRNA量,而不是增加內質網中蛋白折疊的壓力。

附  件 過表達KAR2基因對畢赤酵母產米黑根毛霉脂肪酶的影響
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